ГЛАВА 5. АНТИМИКРОБНЫЕ СВОЙСТВА ЭЛЕКТРОАКТИВИРОВАННОГО СВОЙСТВА АНОЛИТА
Одним из первых экспериментов по изучению свойств анолита были эксперименты по выявлению нижнего предела параметров, при котором на- чинают проявляться его бактерицидные свойства. В качестве тесткультур в этом эксперименте были выбраны следующие культуры Микроорганизмов: - E. coli (кишечная палочка) - как наиболее устойчивый вид из группы кишечных бактерий; - Staphylococcus aureus (стафилококк золотистый) - как наиболее устойчивый вид из кокковой группы микробов; - Bacterium antracoides (антракоид) - один из наиболее устойчивый представителей спорообразующих микроорганизмов. Бактерицидные свойства анолита определялись по методикам, наибо- лее широко используемым в практике для изучения химико-терапевтических и дезинфицирующих средств. Для определения микробных взвесей использовали смыв с суточных культур стафилококка и кишечной палочки. Спорообразующая культура ис- пользовалась после суточной инкубации при 37ОС и дальнейшего выдержи- вания ее в течение 7-8 суток при комнатной температуре. Спорообразова- ние контролировали микроскопией окрашенных мазков. Необходимые концентрации микробных взвесей получали общепринятым путем с помощью эталонного бактериального стандарта мутности. При постановке опытов,принятых для изучения химикотерапевтических веществ, в работе были использованы 3 концентрации микробных взвесей - 2,5 млрд. микробных тел (1), млн. микробных тел (2) и 500 тыс. микроб- ных тел (3), из них наименьшая (3) соответствовала общепринятой стан- дартной концентрации. С целью максимального уменьшения разведения ано- лита, микробные взвеси вводили в исследуемый раствор в объеме 0,2 мл. Исследовались порции ЭВР-А с величиной ОВП от плюс 200 мВ (ис- ходной) до плюс 1260 мВ через каждые 100 мВ. При этом величина рН ЭВР-А изменялась пропорционально ОВП. Концентрация "активного" хлора (С а.х) была не менее 50 мг/л при максимальных параметрах рН (1,2 ед) и ОВП (+1260 мВ). ЭВР-А получали из 0,9% раствора NaCl путем обработки его в диафрагменном электролизере "Эсперо-1". Все образцы растворов исследовались также на стерильность соглас- но инструкции ("Инструкция по бактериологическому контролю консервиро- ванной крови, ее компонентов, препаратов." М., 1974). Для сравнения испытывали широко применяющейся в медицинской прак- тике антибактериальный препарат широкого спектра действия - 0,5%-ный раствор диоксидина, а также дезинфицирующее и антисептетическое средс- тво - 0,1 и 0,5% растворы хлоргексидина биклюконата. Анолит начинал проявлять бактерицидные свойства с параметром ОВП плюс 500 мВ и рН+4,8 ед, при которых ингибировал рост стафилококка и кишечной палочки в третьей (стандартной) концентрации. Наиболее эффективным можно считать анолит с величиной ОВП - от плюс 900 до 1260 мВ и рН - от 3,5 до 1,2 ед. соответственно, С а.х 50 мг/л, при воздействии которого получены совпадающие тремя методами ре- зультаты по бактерицидному эффекту даже при II-й, значительно высокой концентрации микробных взвесей стафилококка и кишечной палочки. Воздействие 0,5% раствора диоксидина и 0,1% раствора хлоргексиди- на оказалось слабее - бактерицидное действие их проявлялось лишь на минимальной (Ш-й) концентрации микробов и не при всех использованных методах. По силе биомикробного воздействия анолит с параметрами ОВП от + 900 до 1260 мВ и рН лт 3,5 до 1,2 ед. можно сравнить лишь с эффектом использования более концентрированного 0,5% раствора хлоргексидина. Бактерицидное действие анолита в отношении Ш-й концентрации про- являлось при активности раствора при параметрах ОВП плюс 900 мВ и выше и рН= 3,5 ед. и ниже, а в отношении П-й концентрации при максимальных показателей активности ОВП = + 1150 и 1260 мВ и рН от 1,5 ед. до 1,2 ед. Однако, эти результаты были получены лишь в методах без использо- вания зараженных тест-объектов - на них растворы оказали споростати- ческое воздействие, задерживая рост микроорганизмов на 2-4 суток. Таким образом, исследованные растворы с параметрами ОВП +900 мВ и выше и рН=3,5 ед. и ниже, С а.х 50 мг/л приводят к гибели стафилококка и кишечной палочки при концентрации 400 млн.микробных тел (П) и споро- вой палочки при концентрации 400 тыс. микробных тел (Ш). Наиболее вы- сокая (1) концентрация микробной взвесии везде давала рост. Однако, при специальных исследованиях, с повторным воздействием растворов (при добавлении свежего раствора к трижды отмытому в физиологическом раст- воре осадку) было установлено бактерицидное действие и на 1 концентра- цию микробной взвеси. Все приведенные выше данные были получены со штаммами микроорга- низмов, наиболее широко используемыми в практике исследования бактери- цидных и бактериостатических свойств тел или иных препаратов. Нами бы- ли проведены исследования влияния анолита с максимальными параметрами ОВП плюс 1260 мВ и рН равным 1,2 ед. и других тест-штаммах (суспензиях суточных агаровых культур музейных штаммов) патогенных и сапрофитных бактерий: 1. E.coli сапрофитный штамм. 2. E.coli 055-патогенный. 3. Staphylococcus Pyogenis N 1;4. 4. Staphylococcus epidermidis N 82. 5. Bacterium subtilis 6. Shigelloe flexneri 7. Shigllae sonnei 8. Salmonellae paratyphi A 9. Salmonellae typhi murium Суточные культуры смывались физиологическим раствором, и суспен- зии их устанавливались по густоте стандарта мутности до 10 ед. (стан- дарт мутности изготовлен гос. контрольным институтом им. Тарасевича). Затем из полученной суспензии готовились разведения в физиологическом растворе до содержания 1 млн. микробных тел в 1 мл суспензии. В опыте использовались 1 мл суспензии, содержащей 1 млн. микробных тел. Воз- действие анолита на суспензии бактерий продолжалось в термостате при Т=37ОС в течение 1-5-15 мин для установления оптимального срока воз- действия анолита на культуры бактерий. Для этого к 1 мл анолита добав- ляли 1 мл суспензий бактерий, содержащей 1 млн. микробных. Опыты показали, что рост бактерий отсутствовал при инкубации в термостате в течение 1 и более мин ( табл. 5.1). После инкубации в термостате, культуры бактерий (1 мл жидкости + анолит) помещали в стерильные чашки Петри и смешивали с 15 мл расплав- ленного и остуженного до 45ОС питательного агара для выращивания в термостате в течение суток. На следующий день производили учет коло- ний, выросших в чашках. Одновременно с опытом ставился контроль: сме- шивали 1 мл суспензии культуры с физиологическим раствором в объеме 1 мл, инкубировали 15 мин в термостате, а затем 1 мл суспензии помещался на чашку Петри, заливался питательным агаром и инкубировался в течение суток. При этом было выявлено, что анолит оказывает бактерицидный эф- фект по отношению ко всем вышеуказанным штаммам бактерий, в то время как в контроле был обнаружен рост бактерий. Как всякая активированная система, анолит подвержен процессу ре- лаксации, т.е. процессу возвращения в состояние устойчивого термодина- мического равновесия. Процесс релаксации у анолита проявляется в пос- тепенной потере им высоких бактерицидных свойств. После процесса ре- лаксации анолит сохраняет невысокую бактерицидность. В период релакса- ции неустойчивые метастабильные соединения в анолите типа HClO перехо- дят в устойчивые HCl,(дополнить).. которые и обеспечивают остаточную бактерицидность анолита. Для определения времени активной бактерицид- ности анолита были использованы следующие культуры: - E.coli сапрофит; - Salmonellae epidermidis; - Staphylococcus pyogenes; - Bacterium sibtilic Все культуры были использованы в концентрациях 1 млн. микробных тел. Анолит получали из 0,9% раствора NaCl в аппарате "Эсперо-1". Па- раметры анолита были - рН=1,2 ед, ОВП - плюс 1260 мВ, С а.х - 50 мг/л. Методика исследований была прежней. В результате исследований было выявлено полное отсутствие роста указанных культур на чашках Петри, при инкубации в течение 2 часов; 24 часов; 7 суток, 14 суток при условии хранения анолита в герметично за- купоренной таре. Начиная с 14 суток отмечался постепенный рост колоний на чашках Петри. Результаты исследований по установлению времени активного бакте- рицидного действия анолита суммированы в табл. 5.2.
![]() Дом. |
![]() Главная |
![]() Отзывы |