2.6. Влияние электроактивированных водных растворов на
          морфологию различных отделов брюшины.

     Электроактивированные водные растворы (ЭВР) - анолит и католит, в настоящее  время  находят все более широкое применение при лечении хи- рургических заболеваний органов брюшной полости.  Они применяются  при гнойно-септических осложнениях,  в частности при перитонитах и нагное- ниях послеоперационных ран.  Однако данные, посвященные изучению влия- нию ЭВР на морфологию брюшины в норме и при ее повреждении единичные.      Учитывая это,  нами было проведено  морфологическое  исследование различных отделов брюшины (тонкой кишки и брыжейки, большого сальника, печени,  передней брюшной стенки и диафрагмы) в различные сроки  после внутрибрюшинного  введения анолита и католита по 10 мл ежедневно в те- чение месяца (редокс-потенциал составлял +800 и -500 мв  соответствен- но).  Контролем служили животные, которым также ежедневно вводилось по 10 мл стерильного физиологического раствора.  Максимальный срок наблю- дения составлял 1 месяц. Животных умерщвляли способом мгновенной дека- питации в сроки 1,  2, 3, 5, 7, 10, 14, 21 и 30 суток с момента начала эксперимента.  Кусочки брюшины исследовали с помощью методик световой, сканирующей и трансмиссионной электронной микроскопии, а также автора- диографии с использованием 3Н-тимидина и морфометрии.      Проведенные исследования показали,  что наиболее выраженные изме- нения отмечались у животных,  которым ежедневно внутрибрюшинно вводили по 10 мл анолита.  Эти изменения характеризовались как явления вялоте- кущего асептического перитонита с постепенно нарастающим фиброзом сое- динительнотканной основы брюшины.  Несмотря на выраженные изменения со стороны брюшины, гибели животных не отмечалось.      Признаки фибротизации соединительнотканной основы брюшины отмеча- лись уже через 7 суток после начала внутрибрюшинного введения анолита. При этом,  макроскопически брюшина имела тусклый вид, отмечено наличие небольших по размерам конгломератов фибрина,  свободно располагающихся в брюшинной полости.  Постоянно отмечалось наличие от 0,3 до  0,5  мл. свободной жидкости с хлопьями фибрина.  По мере увеличения сроков экс- перимента - через 2,  3 и 4 недели, описанные изменения прогрессирова- ли.  Все отделы брюшины выглядели отечными,  утолщенными. Особенно это касалось мембранозной части большого сальника и брыжейки тонкой кишки. Они теряли свою прозрачность, имели тусклый белесый вид. Весьма харак- терным было увеличение размеров печени,  края ее округлялись,  капсула была утолщена.  При сравнении массы печени было установлено, что она в два-три раза превышает массу таковой у интактных животных. Кровеносные сосуды  (особенно вены) брыжейки и висцеральной брюшины были расширен- ными и полнокровными.      Исследование поверхности  брюшины с помощью сканирующей электрон- ной микроскопии (СЭМ) выявило,  что в первые сутки после введения ано- лита отмечается незначительное выбухание апикальной поверхности цитоп- лазматической мембраны мезотелиоцитов, при этом границы между клетками умеренно  расширяются.  Количество  микроворсинок  остается достаточно многочисленным. Спустя 3 - 7 суток на поверхности мезотелиоцитов число микроворсинок и их длина уменьшается. Мезотелиоциты принимают кубичес- кую форму (Рис.2.86). Границы между клетками были расширенными и имели вид глубоких борозд и углублений.  Характерным является выраженный по- лиморфизм мезотелиоцитов (от гексагональной до веретеновидной  формы), который наиболее выражен в поздние сроки эксперимента. Отмечается так- же миграция клеток через расширенные щели между мезотелиоцитами "стиг- маты" (Рис.2.87). Отдельные клетки наслоены друг на друга. Имеет место отложение  масс  фибрина в виде хлопьев на поверхности мезотелиоцитов. Наблюдается фиксация клеток перитонеальной жидкости к поверхности  ме- зотелия. (Рис. 2.88).      Исследование в  ТЭМ  выявляет существенные изменения ультраструк- турной организации мезотелиоцитов.  В ранние  сроки  наблюдения  имеет место умеренное расширение профилей зернистой эндоплазматической сети, при этом увеличивается объем цитоплазмы и ядер клеток.  В субмезотели- альном пространстве выражен отек. (Рис.2.89). Интенсивность пиноцитоза вначале усиливается, а затем снижается. Все мезотелиальные клетки рас- полагаются  на  базальной мембране.  Спустя неделю мезотелиоциты имеют кубическую форму, в их цитоплазме содержатся резко расширенные профили ЗЭС, липидные вакуоли (Рис.2.90).  В данный срок наблюдения отмечается наличие митотически делящихся клеток.  Мезотелиальный пласт становится многорядным.  Имеет место наслоение мезотелиальных клеток друг на дру- га,  при  этом между телами клетками образуются широкие полости и щели (Рис.2.91), часть из которых содержит мелкогранулярное или  хлопьевид- ное содержимое. Особенно этот процесс выражен в области диафрагмальной брюшины,  в частности, в зоне расположения серозно-лимфатических наса- сывающих люков диафрагмы, через которые осуществляется резорбция пери- тонеальной жидкости и растворенных в ней веществ в лимфатические сосу- ды. Просветы последних расширены, что свидетельствует об их динамичес- кой перегрузке (Рис.2.92).В соединительнотканной основе брюшины увели- чивается  количество  фибробластов с хорошо развитыми зернистой эндоп- лазматической сетью и комплексом Гольджи (Рис.2.93).  К 7 суткам отме- чается  начало  фиброзирования брюшины.  При этом соединительнотканная основа утолщается до 10 мкм,  а к 30 суткам ее толщина  возрастает  до 500  мкм.  Основу  утолщенной  соединительнотканной  основы составляют толстые пучки коллагеновых фибрилл, в толще которых располагаются кро- веносные капилляры,  фибробласты и единичные макрофаги (Рис.2.94). Опи- санные изменения распространяются  диффузно  на  все  отделы  брюшины, включая брыжейку тонкой кишки (Рис.2.95, диафрагму (Рис.2.96), парие- тальную брюшину (Рис. 2.97), большой сальник (Рис. 2.98, 2.99), а так- же капсулу печени.      Весьма интересные результаты получены при изучении  пролифератив- ной  активности мезотелиоцитов брыжейки тонкой кишки в различные сроки после внутрибрюшинного введения анолита.  Авторадиогафические исследо- вания пролиферативной активности мезотелиоцитов, проведенные с помощью ЗН-тимидина (через 1 час после введения меченого по  тритию  предшест- венника ДНК), показали, что ежедневное внутрибрюшинное введение аноли- та сопровождается постепенным нарастанием индекса меченых ядер мезоте- лиальных клеток.  При этом,  наряду с увеличением индекса меченых ядер (ИМЯ),  увеличивается интенсивность метки (зерен автографов над  одним ядром становится больше).  Так,  если в контроле ИМЯ весьма не высок и составляет 0,12 %, то через 7 суток он составляет 4,8%, через 14 суток - 10,4%,  через 3 недели-18,6%,  а через месяц - 23,9%  (Рис. 2.100 а, б). То есть, по отношению к контролю практически в 200 раз.      На наш  взгляд этот факт имеет очень важное значение в плане сти- муляции регенерации поврежденных участков брюшины,  как  средства  для профилактики  образования  спаек  в  брюшной полости после оперативных вмешательств.      Как было  отмечено  выше,  длительное  ежедневное внутрибрюшинное введение анолита сопровождается существенным увеличением размеров  пе- чени животных, которая по массе в 2-3 раза превышает таковую у интакт- ных животных. Проведенные светооптические и ультраструктурные исследо- вания показали,  что увеличение массы печени происходит за счет увели- чения объема цитоплазмы гепатоцитов. При этом, в цитоплазме клеток вы- являются признаки гидропической дистрофии (Рис.2.101).Ультраструктурно они проявляются расширением профилей ЗЭС, набуханием и увеличением ми- тохондрий. Ядра клеток также несколько увеличены с просветленной кари- оплазмой. Пространства Диссе узкие, количество микроворсинок несколько снижено. Клетки Купфера увеличены в размерах, ядра их с инвагинирован- ной ядерной мембраной. Все это свидетельствует об активизации макрофа- гальной системы печени. Просветы синусоидных капилляров сужены, малок- ровные. Описанные изменения нарастали по мере увеличения сроков экспе- римента.  Нами не было выявлено наличие некрозов гепатоцитов.  Местами имела место умеренная лимфоцитарная инфильтрация перипортальных  трак- тов (Рис. 2.102). При авторадиографическом исследовании отмечено увеличе- ние ИМЯ гепатоцитов в два - три раза по сравнению с контролем.      Таким образом,  проведенные исследования показали, что ежедневное внутрибрюшинное введение анолита сопровождается выраженной  перестрой- кой структуры брюшины.  Это сопровождается резким усилением пролифера- ции мезотелиальных клеток,  постепенно нарастающим  фиброзом  соедини- тельнотканной основы брюшины, а также новообразованием в ней кровенос- ных капилляров.  Описанные изменения можно расценить как явления  вяло текущего асептического перитонита.  Ни в одном случае нами не было от- мечено гибели животных.      Внутрибрюшинное введение  аналогичного количества католита не вы- зывает столь выраженных изменений в брюшине как анолит.  При макроско- пическом исследовании внешний вид брюшины практически не отличается от такового у животных контрольной группы (которым вводили  физиологичес- кий раствор) и интактных животных.  Макроскопически все отделы брюшины гладкие, блестящие. Отложений фибрина и фибротизации брюшины не наблю- далось.  Размеры  печени животных к концу эксперимента (1 мес) практи- чески не отличались от контроля. Кровеносные сосуды брыжейки были уме- ренно полнокровными.      Исследование поверхности брюшины с помощью сканирующей  электрон- ной микроскопии через 3 - 10 суток с момента начала эксперимента пока- зало,  что ее поверхность выстлана монослоем мезотелиальных клеток, на апикальной поверхности которых содержится большое количество микровор- синок (Рис.2.103). Они, как правило,  тонкие и длинные. Границы между клетками  не выявляются.  В области диафрагмальной брюшины имеет место расширение просветов "стомат" серозно - лимфатических насасывающих лю- ков.      В более поздние сроки эксперимента (2 - 4 нед) отмечалась  незна- чительная  дискомплексация мезотелиоцитов преимущественно висцеральной и диафрагмальной брюшины.  При этом апикальная поверхность цитоплазма- тической  мембраны мезотелиоцитов несколько выбухала в просвет брюшин- ной полости. Количество и форма микроворсинок на поверхности мезотели- оцитов  практически  не  изменялись.  Границы между клетками имели вид глубоких борозд (Рис. 2.104).      При ультраструктурном  исследовании  в  цитоплазме мезотелиоцитов имело место увеличение количества пиноцитозных везикул  (Рис.  2.105), умеренное расширение профилей зернистой эндоплазматической сети,  нез- начительный внутриклеточный  отек  (Рис.  2.106).  Все  мезотелиальные клетки располагались на базальной мембране. В соединительнотканной ос- нове брюшины так же  определялся  незначительный  отек,  проявлявшийся расширением  пространств между пучками коллагеновых фибрилл.  Просветы сосудов микроциркуляторного русла брюшины были  умеренно  расширены  и кровонаполнены.  Просветы лимфатических капилляров, в том числе и лим- фатические лакуны серозно-лимфатических насасывающих  люков  диафрагмы также  были расширенными,  что свидетельствовало об интенсификации ре- зорбции жидкости из брюшной полости и  интерстициального  пространства брюшины.  Нами  не было выявлено развития фиброза соединительнотканной основы брюшины (Рис. 2.107, 2.108).      Проведенное авторадиографическое  исследование  показало,  что  в ранние сроки эксперимента ( до 7 суток) ИМЯ мезотелиальных клеток бры- жейки увеличивается незначительно (0.86%  на 7 сутки).  Через 2 недели он составляет 1,7%, а через месяц - 2,45% (Рис. 2.109). Это существен- но  ниже  чем  после внутрибрюшинного введения анолита.  Тем не менее, можно считать,  что внутрибрюшинное введение католита в течение месяца фактически в 20 раз усиливает уровень пролиферативной активности мезо- телиальных клеток.      Ультраструктурное исследование печени позволило выявить ряд изме- нений, отличных от нормы. Характерным является незначительное увеличе- ние объема цитоплазмы гепатоцитов (Рис.2.110). В них увеличивается со- держание митохондрий,  причем последние увеличиваются в размерах, мат- рикс их просветлен, число крист увеличено (Рис. 2.111). Повышается со- держание зерен гликогена. Гранулярный и гладкий эндоплазматический ре- тикулум  не изменяется.  Больше чем в норме число двуядерных гепатоци- тов.  Просветы перисинусоидных пространств несколько расширены, содер- жат большое количество микроворсинок.  Отмечается "активизация" звезд- чатых эндотелиоцитов (клеток Купфера).  В их цитоплазме содержатся фа- голизосомы,  имеется  большое  количество цитоплазматических выростов, ядра клеток с инвагинированной мембраной.  Просветы синусоидных капил- ляров  умеренно кровонаполнены.  При авторадиографическом исследовании установлено, что индекс меченых ядер гепатоцитов возрастает по сравне- нию с нормой и составляет (0,54% против 0,18% в контроле).      Описанные изменения показывают,  что  длительное  внутрибрюшинное введение  католита вызывает гиперплазию энергетического аппарата гепа- тоцитов (увеличение содержания гликогена,  размеров и количества мито- хондрий),  а также существенно активизируют макрофагальную систему пе- чени.  При этом ультраструктурные  исследования  свидетельствуют,  что внутриклеточные  органеллы,  ответственные за выполнение синтетической функции печени, не изменяются.      Таким образом,  длительное  внутрибрюшинное  введение католита не вызывает существенных структурных изменений со стороны различных отде- лов брюшины.      Нами было проведено также исследование  влияния  электроактивиро- ванных  водных растворов на процессы репаративной регенерации брюшины. Для этого животным с помощью металлического полого пробойника наносили раны  диаметром  0,5  см  на  париетальную брюшину боковой поверхности брюшной стенки.  Дном раны являлась поперечнополосатая мышечная ткань. После нанесения ран брюшная полость ушивалась.  В последующем животным одной группы ежедневно внутрибрюшинно вводили анолит, а другой - като- лит.  Контролем служили животные, у которых происходило спонтанное за- живление ран.      Проведенные исследования показали,  что в контрольной группе на 3 - 5 сутки после повреждения брюшины в дне раны имела место  выраженная воспалительная инфильтрация, представленная макрофагами, лимфоцитами и небольшим количеством нейтрофильных полиморноядерных лейкоцитов  (Рис. 2.112). Мезотелиальная  выстилка на поверхности раны отсутствовала.  В дне раны выявлялись клетки воспалительного инфильтрата, нити фибрина и элементы тканевого  детрита  (Рис.  2.113).  Через 5 суток имела место аналогичная картина.  Полное закрытие раневого дефекта мезотелиоцитами наблюдалось  на 7 - 10 сутки эксперимента.  При этом у многих животных поверхность раневого дефекта или закрывалась  большим  сальником,  или образовывались  спайки с висцеральной брюшиной тонкой или толстой киш- ки.      После введения анолита имело место существенное ускорение  закры- тия раневой поверхности мезотелиальными клетками.  Мезотелиоциты имели небольшие размеры,  форма их была преимущественно овальной или верете- новидной (Рис. 2.114). Степень воспалительной инфильтрации в зоне пов- реждения брюшины была меньшей (Рис.2.115).  На 10 сутки в дне раны вы- являлась соединительная ткань, в толще которой содержались кровеносные капилляры,  фибробласты и небольшое количество макрофагов и лимфоцитов (Рис.2.116). Ни в одном случае не было обнаружено образование спаек  и закрытие раневого дефекта мембранозной частью большого сальника. Таким образом,  внутрибрюшинное введение анолита существенно ускоряет зажив- ление ран брюшины за счет увеличения темпов регенерации мезотелиальных клеток.      При внутрибрюшинном  введении  католита  также  отмечается  более быстрое чем в контроле ускорение заживления ран брюшины.  Также как  и при введении анолита, полное закрытие раневого дефекта отмечается на 5 сутки с момента повреждения брюшины (Рис.2.117). При этом в отличии от предыдущей серии,  мезотелиальные клетки,  выстилающие дно раны, имеют более уплощенную форму, их цитоплазматическая мембрана содержит микро- ворсинки. Весьма часто имеет место фиксация к поверхности мезотелиоци- тов клеток перитонеальной жидкости (Рис.2.118).Степень  воспалительной инфильтрации в дне раневого дефекта, по сравнению с предыдущими серия- ми эксперимента, является наименьшей (Рис. 2.119). Также как при внут- рибрюшинном введении анолита, в данной серии экспериментов нами не бы- ло выявлено образования спаек в брюшине,  а  также  фиксации  большого сальника к поврежденному участку брюшины.      Таким образом,  на основании результатов проведенных исследований можно сделать следующие выводы:      1.Анолит при внутрибрюшинном введении у интактных животных  вызы- вает асептическое воспаление брюшины,  при этом отмечается резкое уси- ление пролиферативной активности мезотелиальных клеток и клеток соеди- нительнотканной основы брюшины.  При длительном внутрибрюшинном введе- нии анолита отмечается выраженный фиброз  соединительнотканной  основы брюшины.      2.Внутрибрюшинное введение  анолита  сопровождается   увеличением массы  печени  за счет гидропической дистрофии гепатоцитов.  При этом, гибели животных не наблюдалось.      3.При повреждении  брюшины внутрибрюшинное введение анолита вызы- вает ускорение репаративной регенерации мезотелия и быструю эпителиза- цию раневого дефекта.      4.католит при внутрибрюшинном введении не  вызывает  существенной реакции со стороны клеток брюшины.      5.В печени при внутрибрюшинном введении католита  отмечается  ги- перплазия  внутриклеточных  органелл,  ответственных за энергетическую функцию клетки - митохондрий.      6.При повреждении  брюшины  введение  католита усиливает процессы репаративной регенерации мезотелиоцитов.      7.При внутрибрюшинном введении электроактивированных водных раст- воров в норме и при повреждении  брюшины  не  наблюдается  образование спаек,  что, вероятно, является следствием снижения адгезивных свойств брюшины.


Дом.

Главная

Отзывы