3.1. Влияние ЭВР на активность некоторых ферментов

     Изучение механизмов медико-биологического действия  "активирован- ных систем" включало в себя испытание их действия на различные метабо- лические процессы.      Учитывая,что состояние метаболзма в организме в целом,в различных органах и тканях его,  а также на уровне отдельных клеток определяется при  прочих  равных условиях состоянием клеточных мембран и активности растворимых ферментных систем клетки, в первую очередь изучали влияние ЭВР на метаболические показатели,отражающие эти функции.      В экспериментах in vivo и in vitro изучалось  действие  активиро- ванного  физиологического раствора хлористого натрия с потенциалом по- рядка +600+1000 мв -600-800 мв. Контролем служили эксперименты с обра- боткой соответственно "обычным" физиологическим раствором.      Эксперименты in vitro      Из миокарда и других органов получали экстракт на трис-сахарозном буфере (рН 714) в соотношении ткань - экстрагирующий  буфер  1:5.Полу- ченный экстракт разводили в соотношении 1:100 - 1: :1000 физиологичес- ким раствором  (рН  9-12;-600-800мв  -  II),тем  же  (рН  7,0;-400-600 мв),тем же (рН 2,5-3,0;  +800+1200мв - IV),тем же (рН 7,0; +600+800 мв -V). (табл. 3.1)      рН доводили до 7,3 с помощью р-ра соляной кислоты и едкого натрия соответственно.      В разведенных экстратах определяли активность ферментов различных классов,  а  именно:альдолазы  (КФ-4.1.2.7),лактатдегидрогеназы  (ЛДГ) КФ1.1.1.27),глютамино-щавелевоуксусной    аминотрансферазы     (ГЩТ,КФ 2.6.11),глютамико-пировиноградной  аминотрансферазы  (ГПТ,КФ 2.6.1.2.) других ферментов.      (КФ - ключ ферментов согласно Номенклатуре Всемирного биохимичес- кого Союза,Москва 1979 г.)                                                Таблица 3.1              Активность ферментов в Е/г миокарда  ш1 --T--------T----------T-----------T-----------T-----------T----------   |        |     I    |     II    |    III    |   IV      |     V пп|Фермент | Контроль | минус 600-| минус 400-|плюс 800 - | плюс 600-   |        |          | минус 800 | минус 600 |плюс 1200  | плюс 800   |        |          |    мВ     |    мВ     |    мВ     |    мВ   |        |          |           |рН 7.1-7.3 | pH 2.5-3.0|  pH 7.0 --+--------+----------+-----------+-----------+-----------+----------- 1.Альдолаза 0.40+0.03  0.018+0.001  0.38+0.05   0.32+0.03  0.026+0.002         р              0.001        0.5         0.05       0.001 2.  ЛДГ      227+16      0.5+0.03    268+11     0.17+0.02   1.52+0.05         р              0.001        0.05        0.001      0.001 3.  ГЩТ      3.1+0.1     0.2+0.01   2.8+0.04    0.1+0.001   0.3+0.05         р              0.001        0.05        0.001      0.05 4.  ГПТ     0.6+0.03        0       0.7+0.01       0           0 ---------------------------------------------------------------------  ш0      Результаты показывают,что "АС"с рН 9-12(-мв) и рН  2,5-3,0  (+мв) вызывают резкое угнетение активности ферментов вплоть до "0".  При до- ведении рН до физиологических значений (7,0-7,3) АС с избыточным отри- цательным потенциалом не оказывают ингбирующего значения, а АС с избы- точным положительным потенциалом сохраняют ингибирующее  действие  той же интенсивности. Следовательно,действие АС (-)рН 7,0 обусловлено сни- жением активности фермента в среде с резким отличием  рН  от  оптимума для  данного  фермента,а действие АС(+) обусловлено избыточным положи- тельным потенцалом и,видимо,связано с конформационными  изменениями  в области активных центров ферментов.  В этом случае АС (+) вероятно об- ладают универсальным фермент-ингибирующим действием.      Эксперименты in vivo      Белым крысам в течение 1 месяца вводили ежедневно  внутрибрюшинно АС(+,-) в количестве 5-10мл. Контрольным животным в таком же объеме, в те же  сроки  тем  же  способом вводили плацебо -дистиллированную воду (табл. 3.2.).      После умерщвления  животных  общепринятым в биологических экспер- ментах методом декапитации собирали кровь и извлекали сердце.      Путем соответствующей обработки получали сыворотку крови тканевые экстракты,  в которых исследовали активность ряда  ферментов:лактатде- гидрогеназы             (ЛДГ,КФ1.1.1.27),глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (ГЛ-6ФГД,КФ1.1.1.49),транскетолазы  (ТК,КФ2.2.1.1.),   альдолазы   (КФ 4.1.2.7),глютамикощавелевоуксусной (КФ2.6.1.1.) и глютамико-пировиног- радной аминотрансфераз (КФ 2.6.1.2).                                                Таблица 3.2       Влияние электрообработанной воды на активность некоторых                          ферментов сыворотки --------------------------------------------------------------------   Фермент           Контроль            АС /+/           АС/-/ --------------------------------------------------------------------   ЛДГ (общая)        454 + 2         420 + 20         515 + 14          р                             0.05              0.05   ЛДГ (печеночная     78 + 6          77 + 5           91 + 4        фракция)          р                               -               0.05   Альдолаза         5.2 + 0.07       4 + 0.03         5.2 + 0.08          р                             0.001              -   ГЩТ                 35 + 1         21 + 0.9         23 + 0.8          р                             0.001             0.001   ГПТ                32 + 0.7        18 + 0.5         16 + 0.3          р                             0.001             0.001 -------------------------------------------------------------------      Из представленных данных видно,что при  внутрибрюшинном  введении АС  (+) не вызывает существенных сдвигов ферментных констелляций сыво- ротки крови по отношению к  контролю,однако  наблюдается  тенденция  к снижению ферментных активностей на 8-40%  АС (-) в этих условиях вызы- вает активацию одних (ЛДГ) снижение активности других  (ГШТ,ГПТ)  фер- ментов.      В ткани миокарда активность ЛДГ,  Г-6 ФДГ,ГЩГ под влиянием  АС(+) не  изменяется,  а  активность  остальных  ферментов  увеличивается на 21-39% и более.(табл.3.3)                                                    Таблица 3.3.            Влияние электрообработанной воды на активность                          ферментов миокарда    ----------------------------------------------------------------------   Фермент           Контроль            АС /+/           АС/-/ ----------------------------------------------------------------------   ЛДГ              278 + 16           280 + 11         364 + 20      р                                 -                0.05   Г-6 ФДГ           53 + 1             60 + 3            63 + 3      р                                  0.05            0.05   ТК               104 + 7            145 + 4           154 + 5      р                                  0.001            0.001   Альдолаза       7.8 + 0.5           9.5 + 0.4        9.2 + 0.2      р                                  0.01             0.01   ГЩТ             7.2 + 0.2           6.4 + 0.3        7.8 + 0.3      р                                  0.05              0.05   ГПТ             1.4 + 0.06          2.6 + 0.08       2.3 + 0.09      р                                 0.001            0.01 ----------------------------------------------------------------------      Под влиянием АС (-) происходит увеличение активности всех изучен- ных ферментов.


Дом.

Главная

Отзывы